Challenge Testi Log Azalması ve Test Mikroorganizmaları

Herhangi bir challenge testi raporunu açın; iki şey bulursunuz: Latince adlarla bir mikroorganizma listesi ve log azalması denilen bir sayı sütunu. İkisi de ürününüzün geçip geçmeyeceğine karar verir, yine de çok az marka sahibine bunların ne anlama geldiği anlatılır. Challenge testi log azalması, canlı mikroorganizmalardaki düşüşün on’un kuvvetleriyle ifade edilmesidir: 1 log, başlangıca göre %90 daha az; 2 log, %99 daha az; 3 log ise %99,9 daha az demektir. Bu rehber matematiği çözümlü örneklerle açıklıyor, beş test organizmasını tanıtıyor ve sayıları yanılmadan nasıl okuyacağınızı gösteriyor.

Kısa cevap

Challenge testinde laboratuvar, ürününüzün ayrı porsiyonlarına, tipik olarak gram başına yüz binlerden bir milyona kadar, büyük ve bilinen sayıda mikroorganizma ekler. Ardından 7, 14 ve 28. günlerde canlı kalanları sayar. Her sayım logaritmaya çevrilir ve başlangıç değerinden çıkarılır. Sonuç olan log azalması, standardın, genellikle ISO 11930’un kriterleriyle karşılaştırılır. Bakteriler en hızlı düşmeli, mayalar daha yavaş, küfler ise en az düşmelidir; çünkü her grup farklı davranır.

“Log azalması” gerçekte ne demek?

Mikrobiyal sayımlar milyonlardan bir avuca kadar çok geniş aralıklara yayılır. Bunları on’un kuvvetleri olarak yazmak karşılaştırmayı kolaylaştırır: 1.000.000, 10’un 6. kuvvetidir ve log 6 diye yazılır; 1.000 ise log 3’tür. Log azalması, başlangıç logu eksi örnekleme gününün logudur.

• 1 log azalma = canlı mikroorganizmalarda %90 azalma
• 2 log = %99 azalma
• 3 log = %99,9 azalma
• 4 log = %99,99 azalma

Yüzdeler farkların ne kadar büyük olduğunu gizler. “%99 öldü” harika duyulur, ama bu sadece 2 log’dur ve bir milyon hücreyle başlandıysa hâlâ 10.000 canlı bırakır. Standartların yüzde değil log kullanmasının nedeni budur.

Şunu da okuyun Kozmetik Challenge Testi Nedir? Koruyucu Etkinlik Testi Açıklaması

Çözümlü bir hesaplama

Laboratuvarın bir losyonu Pseudomonas aeruginosa ile aşıladığını ve başlangıç sayısının gram başına 500.000 koloni oluşturan birim (CFU) olduğunu varsayalım. 500.000’in logu 5,7’dir. 7. günde sayı 200 CFU/g, yani log 2,3’tür. Log azalması 5,7 − 2,3 = 3,4’tür. ISO 11930 A kriterlerine göre bakterilerin 7. güne kadar en az 3 log’a ihtiyacı vardır; yani bu sonuç o günün şartını karşılar.

Şimdi küf. Aspergillus brasiliensis 200.000 CFU/g (log 5,3) ile başlar ve 28. günde 15.000 CFU/g (log 4,2) olur. Azalma 1,1 log’dur. Küf için A kriterleri 14. günde artış olmamasını ve 28. güne kadar en az 1 log’u ister; yani bu da geçer, ancak ancak.

Beş test mikroorganizması ve neden kullanıldıkları

ISO 11930, Ph. Eur. 5.1.3 ve USP 51’in hepsi aynı beş organizmayı kullanır. Laboratuvarlar bunları, sonuçların dünya çapında karşılaştırılabilir olması için tanınmış kültür koleksiyonlarından, örneğin ATCC suşlarından alır.

• Pseudomonas aeruginosa (genellikle ATCC 9027): suda gelişen, birçok koruyucuya dayanan ve göz enfeksiyonlarına yol açabilen Gram-negatif bir bakteri. Bulaşma sorunlarının en sık nedenlerinden biridir.
• Staphylococcus aureus (genellikle ATCC 6538): deride ve burunda taşınan Gram-pozitif bir bakteri; ellerden ve kullanıcılardan gelen bulaşmayı temsil eder.
• Escherichia coli (genellikle ATCC 8739): Gram-negatif bir bakteri ve fekal bulaşmanın ve kötü hijyenin göstergesi.
• Candida albicans (genellikle ATCC 10231): sıvılarda bakteri gibi çoğalan mantar bulaşmasını temsil eden bir maya.
• Aspergillus brasiliensis (genellikle ATCC 16404, eskiden A. niger): dirençli sporlar oluşturan ve koruyuculara en yavaş yanıt veren küf.

Bakteri, maya ve küfün neden farklı hedefleri var?

Bakteriler su bazlı ürünlerde hızla çoğalır; bu yüzden koruyucu sistem onları hızla bastırmalıdır. ISO 11930 A kriterlerinin 7. güne kadar 3 log istemesinin nedeni budur. Mayayı öldürmek daha zordur, bu yüzden aynı sürede hedef 1 log’dur. Küf sporları düşmanca koşullarda hayatta kalmak üzere yapılmıştır, bu yüzden gereklilik daha düşüktür: A kriterlerine göre 14. günde artış olmaması ve 28. güne kadar en az 1 log. B kriterleri bu hedefleri gevşetir ve yalnızca belgelenmiş bir gerekçeyle, örneğin koruyucu ambalajla kabul edilir.

Şunu da okuyun Challenge Testi Maliyeti: Fiyatı Neler Etkiler

“Artış olmaması” ne demek?

Plakalarda koloni saymak hiçbir zaman tam hassas değildir. Aynı örnekten iki plaka farklı çıkabilir, bu yüzden standartlar belli bir tolerans tanır. Örneğin USP 51, “artış olmaması”nı karşılaştırma değerinin 0,5 log’dan fazla üzerinde olmaması olarak tanımlar. Uygulamada, log 5,3’ten log 5,5’e giden bir küf sayısı kararlı sayılırken, log 6,0’a sıçrama gerçek bir artıştır ve başarısızlıktır.

Tespit limitleri ve “küçüktür” sonuçları

Bir koruyucu iyi çalıştığında sayım, yöntemin tespit edebileceği düzeyin altına düşebilir. Rapor o zaman “<10 CFU/g” gibi bir değer ve “>4,7” diye yazılan bir log azalması gösterir. Bu, ürünün steril olduğu anlamına gelmez; hayatta kalanların, seyreltmeye ve kullanılan nötralizana bağlı olan tespit limitinin altında olduğu anlamına gelir. “Büyüktür” sonucu iyi haberdir, ama kesin sayı farklı tespit limitli raporlar arasında karşılaştırılamaz.

Başlangıç sayısı neden önemli?

Her log azalması bir referansa göre hesaplanır. Yönteme bağlı olarak bu, hesaplanan inokulum ya da aşılamadan hemen sonra yapılan bir sayımdır. Laboratuvar ayrıca nötralizanının koruyucunun plaka üzerinde etki etmesini durdurduğunu kontrol eder. Nötralizasyon başarısız olursa koruyucu sayım sırasında da öldürmeye devam eder ve sonuç gerçekte olduğundan daha iyi görünür. Özellikle güçlü koruyuculu veya yüksek alkol içerikli ürünlerde nötralizasyonun doğrulanıp doğrulanmadığını sorun.

Şunu da okuyun Ürünüm Challenge Testini Geçemedi: Sonra Ne Yapmalı

Ürününüzün log azalmasını ne etkiler?

• Koruyucu seçimi ve düzeyi: her koruyucu bakterileri, mayaları ve küfleri farklı kapsar.
• pH: birçok organik asit yalnızca düşük pH’da çalışır. Depolama sırasında pH kayması onları zayıflatabilir; bir stabilite testi yapmanın nedenlerinden biri budur.
• Su aktivitesi ve formül: emülsiyonlar, kıvam vericiler, bitki özleri ve bazı yüzey aktif maddeler koruyucuları bağlayabilir veya inaktive edebilir.
• Ambalaj: test en iyi nihai formülde, nihai ambalajda yapılır.
• Başlangıç kalitesi: bulaşmış bir seri teste ek bir yükle başlar. Bir mikrobiyolojik spesifikasyon testi serinin temiz olduğunu doğrular.

Log azalması raf ömrü değildir

Challenge testi, koruyucu sistemin bir anda, genellikle taze bir seride, bulaşmayla başa çıkıp çıkamadığını gösterir. Ürünün ne kadar süre kararlı kaldığını veya hangi açıldıktan sonra kullanım süresinin (PAO) basılacağını söylemez. Raf ömrü stabilite testlerinden gelir ve bazı değerlendiriciler, koruyucunun aylarca rafta kaldıktan sonra hâlâ çalıştığını göstermek için depolama sonunda da bir challenge testi ister.

Sık yanlış okumalar

• Yüzdeleri kanıt olarak okumak. “%99 azalma” yalnızca 2 log’dur.
• Sadece 28. günü okumak. Bakteriler 7. veya 14. gün hedefini de karşılamalıdır.
• Küfteki küçük azalmayı başarısızlık saymak. Küf için 14. günde artış olmaması tamamen uygun olabilir.
• Raporları bağlamsız karşılaştırmak. Farklı standartlar, tespit limitleri ve inokulum düzeyleri sayıları değiştirir.

Sıkça sorulan sorular

Daha yüksek log azalması her zaman daha mı iyi?

Makul ölçüde evet, çünkü bir güvenlik payı gösterir. Ancak çok agresif bir koruyucu sistem tolerans endişelerini artırabilir; bu yüzden amaç mümkün olan en yüksek öldürme değil, sağlam bir geçiştir.

Küf hedefi neden bu kadar düşük?

Küf sporları doğası gereği dirençlidir ve yavaş tepki verir. Standartlar bu biyolojiyi yansıtırken yine de küfün ürün içinde asla çoğalmamasını şart koşar.

Sonuç nereye gider?

İmzalı rapor Ürün Bilgi Dosyasına girer ve güvenlik değerlendiricisi tarafından CPSR’nin A Kısmında kullanılır.

Önemli çıkarımlar

• Her log on kat düşüştür: 3 log, %99,9 daha az mikroorganizma demektir.
• Log azalması = başlangıç log sayısı eksi örnekleme günündeki log sayısı.
• Beş referans organizma Gram-negatif ve Gram-pozitif bakterileri, mayayı ve küfü kapsar.
• Hedefler organizma grubuna göre değişir ve “<” değerleri sterilliği değil tespit limitlerini yansıtır.