Levures et moisissures en cosmétique : dénombrement et limites

Un rapport de laboratoire arrive et une ligne indique « TYMC : 40 UFC/g ». Est-ce acceptable ? Le dénombrement des levures et moisissures dans les cosmétiques indique combien de champignons vivants contient votre produit fini, et c’est l’une des valeurs qu’un évaluateur de la sécurité vérifie avant de valider une formule. En bref : les laboratoires dénombrent généralement les levures et moisissures selon l’ISO 16212, le résultat est exprimé en UFC par gramme ou par millilitre et, avec le dénombrement des bactéries, il doit respecter la limite de votre catégorie de produit, en général au maximum 100 UFC/g pour les produits destinés aux yeux, aux bébés et aux muqueuses, et au maximum 1 000 UFC/g pour les autres cosmétiques.

La réponse courte

Le TYMC (dénombrement total des levures et moisissures) est un comptage sur boîte des champignons présents dans votre produit. Il fait partie d’un test de spécifications microbiologiques de routine, avec le dénombrement total des bactéries aérobies et la recherche de micro-organismes nocifs spécifiés comme Candida albicans. Un résultat inférieur à la limite de détection, généralement noté « <10 UFC/g », signifie qu’aucune levure ni moisissure n’a été trouvée.

Que mesure le dénombrement des levures et moisissures ?

Les levures et les moisissures sont des champignons, mais elles se comportent différemment. Les levures sont des cellules isolées qui forment des colonies lisses et crémeuses. Les moisissures poussent en filaments et forment des colonies duveteuses aux spores colorées ; ce sont les taches vertes, noires ou blanches que l’on voit parfois sur une crème ou autour du col d’un pot.

Les champignons sont comptés à part parce qu’ils tolèrent un pH plus bas, moins d’eau disponible et beaucoup de sucre : un produit pauvre en bactéries peut donc contenir des champignons. Leurs spores voyagent dans l’air et sur les matières végétales, ce qui fait des ingrédients botaniques, des poudres et des argiles des portes d’entrée classiques.

Les résultats sont exprimés en unités formant colonie (UFC) par gramme ou par millilitre : une estimation des unités viables, pas un comptage exact des cellules.

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Comment le laboratoire réalise-t-il l’essai ?

La méthode de référence pour les cosmétiques est l’ISO 16212, « Cosmétiques – Microbiologie – Dénombrement des levures et des moisissures ». Dans les grandes lignes :

1. Prélèvement. Une partie du produit est prélevée dans des conditions aseptiques, en général dans un contenant non ouvert.
2. Dilution et neutralisation. L’échantillon est généralement dilué au 1/10 dans un liquide qui neutralise aussi les conservateurs, afin qu’ils ne masquent pas une contamination réelle.
3. Ensemencement. La dilution est étalée ou coulée sur une gélose sélective, ou filtrée sur une membrane ensuite posée sur la gélose. Le milieu contient un antibiotique qui inhibe les bactéries, de sorte que ce sont surtout les champignons qui poussent.
4. Incubation. Les boîtes sont incubées à environ 25 °C pendant plusieurs jours, généralement jusqu’à cinq, car beaucoup de moisissures poussent lentement.
5. Comptage. Les colonies sont comptées puis multipliées par le facteur de dilution pour obtenir des UFC/g ou UFC/ml.

Avant les analyses de routine, un bon laboratoire vérifie que le neutralisant fonctionne réellement avec votre formule. C’est particulièrement important pour les produits fortement conservés et les formules contenant des huiles essentielles antimicrobiennes.

Quelles limites s’appliquent aux levures et moisissures ?

Dans l’UE, le règlement (CE) n° 1223/2009 relatif aux produits cosmétiques ne fixe pas de limites microbiennes chiffrées dans le texte de loi. Les évaluateurs de la sécurité s’appuient sur l’ISO 17516 et sur les Notes of Guidance du SCCS, qui distinguent deux catégories de produits :

• Catégorie 1 : produits spécifiquement destinés aux enfants de moins de trois ans, au contour des yeux ou aux muqueuses. Le dénombrement total des micro-organismes aérobies mésophiles ne devrait pas dépasser 100 UFC/g ou ml.
• Catégorie 2 : tous les autres cosmétiques. Le total ne devrait pas dépasser 1 000 UFC/g ou ml.

Dans l’ISO 17516, les micro-organismes aérobies mésophiles regroupent les bactéries ainsi que les levures et moisissures, dénombrées selon l’ISO 21149 et l’ISO 16212. C’est pourquoi votre rapport affiche généralement deux lignes, TAMC et TYMC, et pourquoi le chiffre des levures et moisissures compte dans la limite globale. En plus des dénombrements, la levure Candida albicans ne doit pas être détectée dans 1 g ou ml, pas plus qu’Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus. Certains distributeurs imposent leur propre limite, plus stricte, pour les levures et moisissures : renseignez-vous avant l’analyse.

Comment lire votre résultat

• « <10 UFC/g » : rien n’a poussé à la plus faible dilution testée. C’est le résultat recherché.
• Une valeur faible, par exemple 20 ou 40 UFC/g : quelques unités viables ont été trouvées. Ajoutez-la au dénombrement des bactéries et comparez le total à la limite de votre catégorie.
• « Estimé » ou « est. » : très peu de colonies ont poussé ; le chiffre est approximatif mais valable.
• Un résultat au-dessus de la limite : le lot ne respecte pas la spécification.

Un exemple chiffré : un lait corporel affiche TAMC 30 UFC/g et TYMC 40 UFC/g. Le total, 70 UFC/g, est bien en dessous de la limite de 1 000 UFC/g d’un produit de catégorie 2. Les mêmes valeurs seraient aussi acceptables pour une crème contour des yeux, puisque 70 est inférieur à 100. En revanche, une crème contour des yeux avec un TYMC de 150 UFC/g est non conforme, même si aucune bactérie n’a poussé.

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Quels produits sont les plus exposés ?

• Les crèmes et laits aqueux avec un système conservateur doux ou « sans ».
• Les produits riches en extraits végétaux, poudres botaniques, argiles ou amidons, qui peuvent apporter des spores avec la matière première.
• Les formules conservées par des acides organiques, comme l’acide sorbique ou benzoïque, quand le pH monte trop pour que l’acide agisse.
• Les pots et emballages à large ouverture dans lesquels les clients plongent les doigts.

Les produits à très faible activité de l’eau, à forte teneur en alcool ou à pH extrême peuvent être classés à faible risque microbiologique selon l’ISO 29621. Pour eux, une évaluation des risques documentée peut remplacer les dénombrements de routine, mais cette décision revient à votre évaluateur de la sécurité.

Le dénombrement d’aujourd’hui, la protection de demain

Un faible dénombrement des levures et moisissures montre que le lot était propre au moment de l’analyse. Il ne montre pas que le produit restera propre une fois ouvert par le client. C’est le rôle du challenge test : le produit est volontairement contaminé par des micro-organismes, dont la levure Candida albicans et la moisissure Aspergillus brasiliensis, puis suivi pendant 28 jours. Les moisissures sont souvent les plus difficiles à maîtriser : un dénombrement parfait ne garantit donc pas la réussite. La plupart des produits contenant de l’eau ont besoin des deux résultats.

Quand faut-il analyser ?

• Sur le lot utilisé pour l’évaluation de la sécurité, avant la signature du CPSR.
• Sur les lots de production avant leur libération, à une fréquence fixée par votre système qualité.
• Au début et à la fin d’une étude de stabilité, pour voir si les dénombrements augmentent pendant le stockage.
• Après un nouveau fournisseur d’ingrédient botanique, un nouveau système d’eau ou un nouveau site de production.

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Que faire si le dénombrement est trop élevé ?

1. Bloquez le lot. Ne le vendez pas et ne le mélangez pas à des lots conformes.
2. Demandez une identification au laboratoire. Savoir s’il s’agit d’une levure ou d’une moisissure, et laquelle, oriente vers la source.
3. Vérifiez les suspects habituels. Matières premières botaniques, eau purifiée, équipement de remplissage, joints et salle de remplissage.
4. Revoyez la conservation. Vérifiez le pH, la dose de conservateur et si le système couvre les champignons autant que les bactéries.
5. Analysez à nouveau après l’action corrective et consignez l’enquête dans vos dossiers qualité.

Erreurs fréquentes

• Envoyer un échantillon prélevé dans un contenant déjà ouvert et utilisé.
• Ne tester que les bactéries et oublier les champignons dans un produit riche en botaniques.
• Comparer un produit pour bébés ou pour les yeux à la limite de 1 000 UFC/g au lieu de 100.
• Ignorer une moisissure visible. Si on la voit, le produit n’est pas acceptable, quel que soit le contenu d’un ancien rapport.

Où placer le résultat dans votre documentation ?

La qualité microbiologique du produit fini est l’un des points de la partie A du rapport sur la sécurité du produit cosmétique, comme le prévoit la décision d’exécution 2013/674/UE. Votre évaluateur de la sécurité utilise le dénombrement des levures et moisissures, celui des bactéries et les micro-organismes spécifiés pour confirmer que le produit respecte ses limites, et se réfère au challenge test pour la conservation. Conservez le rapport signé dans votre DIP avec le numéro de lot et la version de la formule.

Questions fréquentes

Des levures ou moisissures sont-elles acceptables dans un cosmétique ?

Oui, dans certaines limites. Les cosmétiques ne sont pas stériles, et un faible nombre de champignons inoffensifs est accepté tant que le total reste dans la limite de la catégorie, que Candida albicans est absente et que le dénombrement n’augmente pas au cours de la vie du produit.

Combien de temps prend un dénombrement des levures et moisissures ?

L’incubation seule dure plusieurs jours, car les moisissures poussent lentement. Notre test de spécifications microbiologiques fournit un rapport PDF signé environ cinq jours après la réception de vos échantillons.

Les produits anhydres ont-ils besoin d’un dénombrement des levures et moisissures ?

Souvent oui, surtout s’ils contiennent des poudres botaniques ou s’ils sont en contact avec l’eau à l’usage. Certains sont considérés à faible risque selon l’ISO 29621 ; votre évaluateur décide.

À retenir

• Le dénombrement des levures et moisissures (TYMC) mesure les champignons viables en UFC/g, généralement selon l’ISO 16212.
• Il compte dans la limite totale : en général 100 UFC/g pour les produits destinés aux yeux, aux bébés et aux muqueuses, et 1 000 UFC/g pour les autres.
• Un dénombrement propre montre la qualité d’aujourd’hui ; le challenge test montre la protection pendant l’utilisation.
• Un dénombrement élevé impose blocage, identification et contrôle des matières premières, de l’eau, des équipements et du conservateur.