Broj kvasaca i plijesni u kozmetici: granice, metoda i rezultati

U vaš inbox stigne laboratorijski izvještaj i jedan redak glasi „TYMC: 40 CFU/g”. Je li to u redu? Broj kvasaca i plijesni u kozmetici pokazuje koliko živih gljivica ima u vašem gotovom proizvodu, a to je jedan od brojeva koje procjenitelj sigurnosti provjerava prije nego što odobri formulu. Ukratko: laboratoriji kvasce i plijesni obično broje prema ISO 16212, rezultat se izražava u CFU po gramu ili mililitru, a zajedno s brojem bakterija mora ostati unutar granice za kategoriju vašeg proizvoda, obično najviše 100 CFU/g za proizvode za oči, bebe i sluznice te najviše 1000 CFU/g za ostalu kozmetiku.

Kratak odgovor

TYMC (total yeast and mould count, ukupan broj kvasaca i plijesni) je brojanje gljivica u proizvodu na hranjivim pločama. Dio je rutinskog testa mikrobioloških specifikacija, uz ukupan broj aerobnih bakterija i provjere specificiranih štetnih organizama poput Candida albicans. Rezultat ispod granice detekcije, obično zapisan kao „<10 CFU/g”, znači da nisu pronađeni ni kvasci ni plijesni.

Što mjeri broj kvasaca i plijesni?

Kvasci i plijesni su gljivice, ali se ponašaju različito. Kvasci su pojedinačne stanice koje tvore glatke, kremaste kolonije. Plijesni rastu kao niti i tvore paperjaste kolonije s obojenim sporama; to su zelene, crne ili bijele točkice koje možete vidjeti na kremi ili oko vrata staklenke.

Gljivice se broje zasebno jer podnose niži pH, manje dostupne vode i visok udio šećera, pa proizvod s malo bakterija ipak može sadržavati gljivice. Njihove spore putuju zrakom i biljnim materijalom, zbog čega su biljni sastojci, praškovi i gline tipične ulazne točke.

Rezultati se izražavaju u jedinicama koje tvore kolonije (CFU) po gramu ili mililitru: riječ je o procjeni održivih jedinica, a ne o točnom broju stanica.

Pročitajte i ISO 17516 za kozmetiku: mikrobiološke granice objašnjene

Kako laboratoriji provode test?

Referentna metoda za kozmetiku je ISO 16212, „Cosmetics – Microbiology – Enumeration of yeast and mould”. Ukratko:

1. Uzorkovanje. Dio proizvoda uzima se u aseptičnim uvjetima, obično iz neotvorene ambalaže.
2. Razrjeđivanje i neutralizacija. Uzorak se obično razrjeđuje 1 : 10 u tekućini koja ujedno neutralizira konzervanse kako oni ne bi prikrili stvarnu kontaminaciju.
3. Nasađivanje. Razrjeđenje se razmazuje ili izlijeva na selektivni agar ili se filtrira kroz membranu koja se zatim stavlja na agar. Podloga sadrži antibiotik koji suzbija bakterije pa uglavnom rastu gljivice.
4. Inkubacija. Ploče se inkubiraju na oko 25 °C nekoliko dana, obično do pet, jer mnoge plijesni rastu sporo.
5. Brojanje. Kolonije se broje i množe faktorom razrjeđenja kako bi se dobio CFU/g ili CFU/mL.

Prije rutinskog testiranja dobar laboratorij provjerava djeluje li neutralizator doista za vašu formulu. To je najvažnije za jako konzervirane proizvode i formule s antimikrobnim eteričnim uljima.

Koje granice vrijede za kvasce i plijesni?

U EU-u Uredba o kozmetičkim proizvodima (EZ) br. 1223/2009 u tekstu zakona ne propisuje brojčane mikrobiološke granice. Procjenitelji sigurnosti stoga se oslanjaju na ISO 17516 i SCCS Notes of Guidance, koji koriste dvije kategorije proizvoda:

• Kategorija 1: proizvodi posebno namijenjeni djeci mlađoj od tri godine, području oko očiju i sluznicama. Ukupan broj aerobnih mezofilnih mikroorganizama ne bi smio prelaziti 100 CFU/g ili mL.
• Kategorija 2: sva ostala kozmetika. Ukupan broj ne bi smio prelaziti 1000 CFU/g ili mL.

U ISO 17516 aerobni mezofilni mikroorganizmi znače bakterije plus kvasci i plijesni, mjereni prema ISO 21149 i ISO 16212. Zato izvještaj obično ima dva retka, TAMC i TYMC, i zato se broj kvasaca i plijesni uračunava u ukupnu granicu. Uz brojeve, u 1 g ili mL ne smije biti otkriven kvasac Candida albicans, kao ni Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa i Staphylococcus aureus. Neki trgovci postavljaju vlastitu, strožu granicu za kvasce i plijesni pa upitajte prije testiranja.

Kako pročitati rezultat

• „<10 CFU/g”: ništa nije izraslo pri najnižem testiranom razrjeđenju. To je rezultat koji želite.
• Nizak broj poput 20 ili 40 CFU/g: pronađeno je nekoliko održivih jedinica. Pribrojite ga broju bakterija i usporedite zbroj s granicom za svoju kategoriju.
• „Estimated” ili „est.”: izraslo je vrlo malo kolonija; vrijednost je približna, ali valjana.
• Rezultat iznad granice: serija ne zadovoljava specifikaciju.

Primjer: losion za tijelo ima TAMC 30 CFU/g i TYMC 40 CFU/g. Zbroj od 70 CFU/g znatno je ispod granice od 1000 CFU/g za proizvod kategorije 2. Isti brojevi prihvatljivi su i za kremu za oči jer je 70 manje od 100. No krema za oči s TYMC 150 CFU/g ne zadovoljava, čak i ako nijedna bakterija nije izrasla.

Pročitajte i Kategorija 1 i 2 kozmetike: mikrobne granice

Koji su proizvodi najugroženiji?

• Kreme i losioni na bazi vode s blagim konzervirajućim sustavom ili sustavom „free-from”.
• Proizvodi bogati biljnim ekstraktima, biljnim praškovima, glinama ili škrobovima, koji sa sirovinom mogu donijeti spore.
• Formule konzervirane organskim kiselinama, poput sorbinske ili benzojeve, kada pH previše poraste da bi kiselina djelovala.
• Staklenke i ambalaža sa širokim otvorom u koje kupci zaranjaju prste.

Proizvodi s vrlo niskom aktivnošću vode, visokim udjelom alkohola ili ekstremnim pH mogu se prema ISO 29621 svrstati u nizak mikrobiološki rizik. Za njih dokumentirana procjena rizika može zamijeniti rutinska brojanja, ali tu odluku donosi vaš procjenitelj sigurnosti.

Broj danas, zaštita sutra

Nizak broj kvasaca i plijesni pokazuje da je serija bila čista kad je testirana. Ne pokazuje da će proizvod ostati čist nakon što ga kupac otvori. To je zadaća challenge testa, u kojem se proizvod namjerno inokulira mikroorganizmima, uključujući kvasac Candida albicans i plijesan Aspergillus brasiliensis, i prati 28 dana. Plijesni je često najteže kontrolirati pa savršen broj ne jamči prolaz. Većini proizvoda na bazi vode trebaju oba rezultata.

Kada testirati?

• Na seriji korištenoj za procjenu sigurnosti, prije potpisivanja CPSR-a.
• Na proizvodnim serijama prije puštanja u promet, učestalošću određenom u vašem sustavu kvalitete.
• Na početku i na kraju studije stabilnosti, kako biste vidjeli raste li broj tijekom skladištenja.
• Nakon novog dobavljača biljnih sirovina, promjene sustava vode ili proizvodnog pogona.

Pročitajte i Ukupni broj aerobnih mikroorganizama u kozmetici

Što učiniti ako je broj previsok

1. Stavite seriju u karantenu. Ne prodajte je i ne miješajte s čistim serijama.
2. Zatražite od laboratorija identifikaciju. Saznanje je li riječ o kvascu ili plijesni, i kojoj, upućuje na izvor.
3. Provjerite uobičajene krivce. Biljne sirovine, pročišćenu vodu, opremu za punjenje, brtve i prostoriju za punjenje.
4. Preispitajte konzervans. Provjerite pH, dozu konzervansa i pokriva li sustav osim bakterija i gljivice.
5. Ponovno testirajte nakon korektivne mjere i istragu pohranite u evidenciju kvalitete.

Česte pogreške

• Slanje uzorka iz otvorene, već korištene ambalaže.
• Testiranje samo bakterija i zaboravljanje gljivica kod proizvoda bogatog biljnim sastojcima.
• Uspoređivanje proizvoda za bebe ili oči s granicom od 1000 CFU/g umjesto 100.
• Ignoriranje vidljive plijesni. Ako je vidite, proizvod nije prihvatljiv, što god govorio stariji izvještaj.

Gdje rezultat ide u vašoj dokumentaciji?

Mikrobiološka kvaliteta gotovog proizvoda jedna je od stavki dijela A izvješća o sigurnosti kozmetičkog proizvoda, kako je utvrđeno Provedbenom odlukom 2013/674/EU. Vaš procjenitelj sigurnosti koristi broj kvasaca i plijesni, broj bakterija i specificirane organizme kako bi potvrdio da proizvod zadovoljava granice, a za konzerviranje upućuje na challenge test. Potpisani izvještaj čuvajte u svojoj dokumentaciji o proizvodu (PIF) s brojem serije i verzijom formule.

Često postavljana pitanja

Je li u kozmetici prihvatljiv ikakav kvasac ili plijesan?

Da, unutar granica. Kozmetika nije sterilna, a nizak broj bezopasnih gljivica prihvaća se sve dok ukupan broj ostaje unutar granice kategorije, Candida albicans nije prisutna i broj ne raste tijekom roka trajanja proizvoda.

Koliko traje određivanje broja kvasaca i plijesni?

Samo inkubacija traje nekoliko dana jer plijesni rastu sporo. Naš test mikrobioloških specifikacija isporučuje potpisani PDF izvještaj otprilike pet dana nakon primitka vaših uzoraka.

Treba li bezvodnim proizvodima broj kvasaca i plijesni?

Često da, osobito s biljnim praškovima ili kontaktom s vodom tijekom uporabe. Neki se prema ISO 29621 kvalificiraju kao niskorizični; odlučuje vaš procjenitelj.

Ključne poruke

• Broj kvasaca i plijesni (TYMC) mjeri održive gljivice u CFU/g, obično prema ISO 16212.
• Uračunava se u ukupnu granicu: obično 100 CFU/g za proizvode za oči, bebe i sluznice te 1000 CFU/g za ostale.
• Čist rezultat pokazuje današnju kvalitetu; challenge test pokazuje zaštitu tijekom uporabe.
• Visok broj zahtijeva karantenu, identifikaciju i provjeru sirovina, vode, opreme i konzervansa.