Počet kvasiniek a plesní v kozmetike: limity, metóda a výsledky

Do vašej schránky dorazí laboratórna správa a jeden riadok znie „TYMC: 40 CFU/g“. Je to v poriadku? Počet kvasiniek a plesní v kozmetike hovorí, koľko živých húb je vo vašom hotovom výrobku, a je to jedno z čísel, ktoré posudzovateľ bezpečnosti kontroluje skôr, než formulu schváli. Stručne: laboratóriá kvasinky a plesne zvyčajne počítajú podľa ISO 16212, výsledok sa uvádza v CFU na gram alebo mililiter a spolu s počtom baktérií musí zostať v limite pre vašu kategóriu výrobku, zvyčajne najviac 100 CFU/g pri výrobkoch pre oči, dojčatá a sliznice a najviac 1 000 CFU/g pri ostatnej kozmetike.

Stručná odpoveď

TYMC (total yeast and mould count, celkový počet kvasiniek a plesní) je počet húb vo výrobku zistený na kultivačných miskách. Je súčasťou bežného testu mikrobiologických špecifikácií, popri celkovom počte aeróbnych baktérií a kontrolách špecifikovaných škodlivých organizmov, ako je Candida albicans. Výsledok pod hranicou detekcie, zvyčajne uvádzaný ako „<10 CFU/g“, znamená, že sa nenašla žiadna kvasinka ani pleseň.

Čo počet kvasiniek a plesní meria?

Kvasinky aj plesne sú huby, ale správajú sa odlišne. Kvasinky sú jednotlivé bunky tvoriace hladké, krémové kolónie. Plesne rastú vo vláknach a tvoria chmýrovité kolónie s farebnými sporami; sú to zelené, čierne alebo biele škvrny, ktoré môžete vidieť na kréme alebo okolo hrdla téglika.

Huby sa počítajú osobitne, pretože znášajú nižšie pH, menej dostupnej vody a vysoký obsah cukru, takže výrobok s malým množstvom baktérií môže napriek tomu obsahovať huby. Ich spóry sa šíria vzduchom a rastlinným materiálom, takže typickými vstupnými bránami sú botanické suroviny, prášky a íly.

Výsledky sa uvádzajú v kolóniotvorných jednotkách (CFU) na gram alebo mililiter: ide o odhad životaschopných jednotiek, nie o presný počet buniek.

Prečítajte si aj ISO 17516 kozmetika: mikrobiologické limity

Ako laboratóriá test vykonávajú?

Referenčnou metódou pre kozmetiku je ISO 16212, „Cosmetics – Microbiology – Enumeration of yeast and mould“. V skratke:

1. Odber vzorky. Časť výrobku sa odoberá za aseptických podmienok, zvyčajne z neotvoreného obalu.
2. Riedenie a neutralizácia. Vzorka sa zvyčajne riedi v pomere 1 : 10 v kvapaline, ktorá zároveň neutralizuje konzervanty, aby nemohli zakryť skutočnú kontamináciu.
3. Zaočkovanie. Zriedená vzorka sa roztiera alebo zaleje selektívnym agarom, prípadne sa filtruje cez membránu, ktorá sa potom položí na agar. Médium obsahuje antibiotikum potláčajúce baktérie, takže rastú predovšetkým huby.
4. Inkubácia. Misky sa inkubujú pri približne 25 °C niekoľko dní, zvyčajne až päť, pretože mnohé plesne rastú pomaly.
5. Počítanie. Kolónie sa spočítajú a vynásobia faktorom riedenia, čím sa získa CFU/g alebo CFU/mL.

Pred rutinným testovaním dobré laboratórium overí, že neutralizátor pre vašu formulu skutočne funguje. To je najdôležitejšie pri silno konzervovaných výrobkoch a formulách s antimikrobiálnymi esenciálnymi olejmi.

Aké limity platia pre kvasinky a plesne?

V EÚ nariadenie o kozmetických výrobkoch (ES) č. 1223/2009 v texte zákona číselné mikrobiálne limity nestanovuje. Posudzovatelia bezpečnosti sa preto opierajú o ISO 17516 a SCCS Notes of Guidance, ktoré používajú dve kategórie výrobkov:

• Kategória 1: výrobky určené osobitne pre deti do troch rokov, pre oblasť očí a pre sliznice. Celkový počet aeróbnych mezofilných mikroorganizmov by nemal presiahnuť 100 CFU/g alebo mL.
• Kategória 2: všetka ostatná kozmetika. Celkový počet by nemal presiahnuť 1 000 CFU/g alebo mL.

Aeróbnymi mezofilnými mikroorganizmami sa v ISO 17516 rozumejú baktérie plus kvasinky a plesne, merané podľa ISO 21149 a ISO 16212. Preto vaša správa zvyčajne obsahuje dva riadky, TAMC a TYMC, a preto sa údaj o kvasinkách a plesniach započítava do celkového limitu. Okrem počtov nesmie byť v 1 g alebo mL zistená kvasinka Candida albicans, rovnako ako Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa a Staphylococcus aureus. Niektorí predajcovia majú vlastný, prísnejší limit pre kvasinky a plesne, preto sa pred testovaním opýtajte.

Ako čítať výsledok

• „<10 CFU/g“: pri najnižšom testovanom riedení nič nevyrástlo. To je výsledok, ktorý chcete.
• Nízke číslo, napríklad 20 alebo 40 CFU/g: našlo sa niekoľko životaschopných jednotiek. Pripočítajte ho k počtu baktérií a porovnajte súčet s limitom pre vašu kategóriu.
• „Estimated“ alebo „est.“: vyrástlo veľmi málo kolónií; údaj je približný, ale platný.
• Výsledok nad limitom: šarža nevyhovuje špecifikácii.

Vzorový príklad: telové mlieko uvádza TAMC 30 CFU/g a TYMC 40 CFU/g. Súčet 70 CFU/g je hlboko pod limitom 1 000 CFU/g pre výrobok kategórie 2. Rovnaké čísla sú prijateľné aj pri očnom kréme, pretože 70 je menej ako 100. Očný krém s TYMC 150 CFU/g však nevyhovie, aj keby nevyrástla ani jedna baktéria.

Prečítajte si aj Kozmetika kategórie 1 a 2: mikrobiálne limity

Ktoré výrobky sú najohrozenejšie?

• Krémy a mlieka na vodnej báze s miernym konzervačným systémom alebo systémom „free-from“.
• Výrobky bohaté na rastlinné extrakty, botanické prášky, íly alebo škroby, ktoré môžu so surovinou priniesť spóry.
• Formuly konzervované organickými kyselinami, napríklad sorbovou alebo benzoovou, keď pH vystúpi príliš vysoko na to, aby kyselina účinkovala.
• Téglik a obaly so širokým hrdlom, do ktorých zákazníci namáčajú prsty.

Výrobky s veľmi nízkou aktivitou vody, vysokým obsahom alkoholu alebo extrémnym pH môžu byť podľa ISO 29621 zaradené medzi výrobky s nízkym mikrobiologickým rizikom. Pri nich môže zdokumentované posúdenie rizika nahradiť rutinné stanovenia počtov, ale toto rozhodnutie patrí vášmu posudzovateľovi bezpečnosti.

Počet dnes vs. ochrana zajtra

Nízky počet kvasiniek a plesní ukazuje, že šarža bola v čase testovania čistá. Neukazuje, že výrobok zostane čistý, keď ho zákazník otvorí. To je úloha záťažového testu (challenge testu), pri ktorom sa výrobok zámerne zaočkuje mikroorganizmami, vrátane kvasinky Candida albicans a plesne Aspergillus brasiliensis, a sleduje sa 28 dní. Plesne sa často kontrolujú najhoršie, takže dokonalý počet nezaručuje úspech. Väčšina výrobkov na vodnej báze potrebuje oba výsledky.

Kedy testovať?

• Na šarži použitej na posúdenie bezpečnosti, pred podpisom CPSR.
• Na výrobných šaržiach pred uvoľnením, s frekvenciou stanovenou vo vašom systéme kvality.
• Na začiatku a na konci štúdie stability, aby ste zistili, či počty počas skladovania rastú.
• Po zmene dodávateľa botanických surovín, vodného systému alebo výrobného miesta.

Prečítajte si aj Celkový počet aeróbov v kozmetike: čo znamená

Čo robiť, keď je počet príliš vysoký

1. Šaržu izolujte. Nepredávajte ju a nemiešajte ju s čistými šaržami.
2. Požiadajte laboratórium o identifikáciu. Vedieť, či ide o kvasinku, alebo plesň a o ktorú, ukáže na zdroj.
3. Skontrolujte obvyklých podozrivých. Botanické suroviny, purifikovanú vodu, plniace zariadenie, tesnenia a plniacu miestnosť.
4. Skontrolujte konzervant. Overte pH, dávku konzervantu a to, či systém okrem baktérií pokrýva aj huby.
5. Po nápravnom opatrení test zopakujte a vyšetrovanie uložte do záznamov o kvalite.

Časté chyby

• Odoslanie vzorky z otvoreného, už používaného obalu.
• Testovanie iba baktérií a zabudnutie na huby pri výrobku bohatom na botanické zložky.
• Porovnanie dojčenského alebo očného výrobku s limitom 1 000 CFU/g namiesto 100.
• Ignorovanie viditeľnej plesne. Ak ju vidíte, výrobok je neprijateľný, nech starší protokol hovorí čokoľvek.

Kam sa výsledok v dokumentácii zapisuje?

Mikrobiologická kvalita hotového výrobku je jednou z položiek časti A správy o bezpečnosti kozmetického výrobku, ako ustanovuje vykonávacie rozhodnutie 2013/674/EÚ. Váš posudzovateľ bezpečnosti používa počet kvasiniek a plesní, počet baktérií a špecifikované organizmy na potvrdenie, že výrobok spĺňa svoje limity, a pokiaľ ide o konzerváciu, odkazuje na záťažový test. Podpísanú správu uložte do súboru informácií o výrobku (PIF) spolu s číslom šarže a verziou formuly.

Často kladené otázky

Je nejaká kvasinka alebo pleseň v kozmetike prijateľná?

Áno, v medziach limitov. Kozmetika nie je sterilná a nízky počet neškodných húb je prijateľný, ak celkový počet zostáva v limite kategórie, Candida albicans chýba a počet počas životnosti výrobku nerastie.

Ako dlho trvá stanovenie počtu kvasiniek a plesní?

Samotná inkubácia trvá niekoľko dní, pretože plesne rastú pomaly. Náš test mikrobiologických špecifikácií dodá podpísanú správu v PDF zhruba päť dní po prijatí vašich vzoriek.

Potrebujú bezvodé výrobky stanovenie počtu kvasiniek a plesní?

Často áno, najmä s botanickými práškami alebo pri kontakte s vodou počas používania. Niektoré spĺňajú podmienky nízkeho rizika podľa ISO 29621; rozhoduje váš posudzovateľ.

Hlavné poznatky

• Počet kvasiniek a plesní (TYMC) meria životaschopné huby v CFU/g, zvyčajne podľa ISO 16212.
• Započítava sa do celkového limitu: zvyčajne 100 CFU/g pre výrobky pre oči, dojčatá a sliznice a 1 000 CFU/g pre ostatné.
• Čistý výsledok ukazuje dnešnú kvalitu; záťažový test ukazuje ochranu počas používania.
• Vysoký počet vyžaduje izoláciu šarže, identifikáciu a kontrolu surovín, vody, zariadenia a konzervantu.