Število kvasovk in plesni v kozmetiki: meje, metoda, rezultati

V nabiralnik prispe laboratorijsko poročilo, v eni vrstici pa piše »TYMC: 40 CFU/g«. Je to v redu? Število kvasovk in plesni v kozmetiki pove, koliko živih gliv vsebuje vaš končni izdelek, in je ena od vrednosti, ki jih ocenjevalec varnosti preveri, preden potrdi formulacijo. Na kratko: laboratoriji kvasovke in plesni običajno štejejo po standardu ISO 16212, rezultat je podan v CFU na gram ali mililiter in skupaj s številom bakterij mora ostati v mejah za vašo kategorijo izdelka – praviloma največ 100 CFU/g za izdelke za oči, dojenčke in sluznice ter največ 1.000 CFU/g za drugo kozmetiko.

Kratek odgovor

TYMC (skupno število kvasovk in plesni) je štetje gliv v vašem izdelku na ploščah. Je del rutinskega testa mikrobioloških specifikacij, skupaj s skupnim številom aerobnih bakterij in preverjanjem določenih škodljivih mikroorganizmov, kot je Candida albicans. Rezultat pod mejo zaznavnosti, običajno zapisan kot »<10 CFU/g«, pomeni, da kvasovk in plesni niso našli.

Kaj meri število kvasovk in plesni?

Kvasovke in plesni so glive, vendar se obnašajo različno. Kvasovke so posamezne celice, ki tvorijo gladke, kremaste kolonije. Plesni rastejo v nitkah in tvorijo puhaste kolonije z obarvanimi sporami; to so zelene, črne ali bele pike, ki jih včasih vidite na kremi ali okoli vratu lončka.

Glive štejemo posebej, ker prenesejo nižji pH, manj razpoložljive vode in veliko sladkorja, zato lahko izdelek z malo bakterijami še vedno vsebuje glive. Njihove spore potujejo po zraku in na rastlinskem materialu, zato so rastlinske sestavine, praški in gline tipična vstopna pot.

Rezultati so podani v enotah, ki tvorijo kolonije (CFU), na gram ali mililiter: to je ocena živih enot, ne natančno število celic.

Preberite tudi ISO 17516 kozmetika: mikrobiološke meje pojasnjene

Kako laboratorij izvede test?

Referenčna metoda za kozmetiko je ISO 16212, »Kozmetika – Mikrobiologija – Štetje kvasovk in plesni«. V grobem:

1. Vzorčenje. Del izdelka se odvzame v aseptičnih pogojih, običajno iz neodprte embalaže.
2. Redčenje in nevtralizacija. Vzorec se običajno razredči 1 : 10 v tekočini, ki hkrati nevtralizira konzervanse, da ti ne bi prikrili dejanske kontaminacije.
3. Nasajanje. Razredčino razmažejo ali vlijejo na selektivni agar ali pa jo prefiltrirajo skozi membrano, ki jo nato položijo na agar. Gojišče vsebuje antibiotik, ki zavira bakterije, zato rastejo predvsem glive.
4. Inkubacija. Plošče inkubirajo pri približno 25 °C več dni, običajno do pet, ker mnoge plesni rastejo počasi.
5. Štetje. Kolonije preštejejo in pomnožijo z faktorjem redčenja, da dobijo CFU/g ali CFU/ml.

Pred rutinskim testiranjem dober laboratorij preveri, ali nevtralizator pri vaši formulaciji res deluje. To je najpomembnejše pri močno konzerviranih izdelkih in formulacijah z antimikrobnimi eteričnimi olji.

Katere meje veljajo za kvasovke in plesni?

V EU Uredba (ES) št. 1223/2009 o kozmetičnih izdelkih v besedilu zakona ne določa številčnih mikrobioloških mej. Ocenjevalci varnosti se zato opirajo na ISO 17516 in smernice SCCS (Notes of Guidance), ki uporabljajo dve kategoriji izdelkov:

• Kategorija 1: izdelki, posebej namenjeni otrokom, mlajšim od treh let, predelu okoli oči ali sluznicam. Skupno število aerobnih mezofilnih mikroorganizmov naj ne presega 100 CFU/g ali ml.
• Kategorija 2: vsa druga kozmetika. Skupno število naj ne presega 1.000 CFU/g ali ml.

V ISO 17516 aerobni mezofilni mikroorganizmi pomenijo bakterije ter kvasovke in plesni, določene po ISO 21149 in ISO 16212. Zato poročilo običajno vsebuje dve vrstici, TAMC in TYMC, in zato se število kvasovk in plesni šteje v skupno mejo. Poleg števil kvasovka Candida albicans v 1 g ali ml ne sme biti zaznana, prav tako ne Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa in Staphylococcus aureus. Nekateri trgovci določijo svojo, strožjo mejo za kvasovke in plesni, zato jih vprašajte pred testiranjem.

Kako prebrati rezultat

• »<10 CFU/g«: pri najnižji preizkušeni razredčini ni zraslo nič. To je rezultat, ki ga želite.
• Nizka vrednost, na primer 20 ali 40 CFU/g: najdenih je bilo nekaj živih enot. Prištejte jo številu bakterij in vsoto primerjajte z mejo za svojo kategorijo.
• »Ocenjeno« ali »est.«: zraslo je zelo malo kolonij; vrednost je približna, a veljavna.
• Rezultat nad mejo: serija ne izpolnjuje specifikacije.

Primer: losjon za telo ima TAMC 30 CFU/g in TYMC 40 CFU/g. Vsota, 70 CFU/g, je precej pod mejo 1.000 CFU/g za izdelek kategorije 2. Enake vrednosti bi bile sprejemljive tudi pri kremi za predel okoli oči, ker je 70 manj kot 100. Krema za oči s TYMC 150 CFU/g pa ne ustreza, tudi če ni zrasla nobena bakterija.

Preberite tudi Kozmetika kategorije 1 in 2: mikrobne omejitve

Kateri izdelki so najbolj ogroženi?

• Kreme in losjoni na vodni osnovi z blagim konzervansom ali sistemom »brez«.
• Izdelki z veliko rastlinskimi izvlečki, rastlinskimi praški, glinami ali škrobi, ki lahko s surovino prinesejo spore.
• Formulacije, konzervirane z organskimi kislinami, kot sta sorbinska ali benzojska kislina, kadar pH naraste previsoko, da bi kislina delovala.
• Lončki in embalaža s širokim grlom, v katero kupci segajo s prsti.

Izdelki z zelo nizko aktivnostjo vode, visoko vsebnostjo alkohola ali skrajnim pH so lahko po ISO 29621 razvrščeni kot mikrobiološko nizkotvegani. Pri njih lahko dokumentirana ocena tveganja nadomesti rutinsko štetje, vendar o tem odloča vaš ocenjevalec varnosti.

Štetje danes, zaščita jutri

Nizko število kvasovk in plesni pokaže, da je bila serija čista v času testiranja. Ne pokaže pa, da bo izdelek ostal čist, ko ga kupec odpre. To je naloga challenge testa, pri katerem izdelek namerno okužijo z mikroorganizmi, med njimi s kvasovko Candida albicans in plesnijo Aspergillus brasiliensis, ter ga spremljajo 28 dni. Plesni je pogosto najtežje obvladati, zato popolno štetje ne zagotavlja uspešnega testa. Večina izdelkov z vodo potrebuje oba rezultata.

Kdaj testirati?

• Na seriji, ki se uporabi za oceno varnosti, preden je CPSR podpisan.
• Na proizvodnih serijah pred sprostitvijo, s pogostostjo, ki jo določa vaš sistem kakovosti.
• Na začetku in koncu testa stabilnosti, da vidite, ali se število med skladiščenjem poveča.
• Po zamenjavi dobavitelja rastlinske surovine, novem vodnem sistemu ali novi proizvodni lokaciji.

Preberite tudi Skupno aerobno število v kozmetiki: kaj pomeni

Kaj storiti, če je število previsoko

1. Serijo zadržite. Ne prodajajte je in je ne mešajte s čistimi serijami.
2. Laboratorij prosite za identifikacijo. Ali gre za kvasovko ali plesen in katero, kaže na vir.
3. Preverite običajne osumljence. Rastlinske surovine, prečiščeno vodo, polnilno opremo, tesnila in prostor za polnjenje.
4. Preglejte konzervans. Preverite pH, odmerek konzervansa in ali sistem poleg bakterij pokriva tudi glive.
5. Po korektivnem ukrepu ponovno testirajte in preiskavo shranite v evidence kakovosti.

Pogoste napake

• Pošiljanje vzorca iz že odprte in uporabljene embalaže.
• Testiranje samo bakterij in pozabljanje na glive pri izdelku z veliko rastlinskimi sestavinami.
• Primerjanje izdelka za dojenčke ali oči z mejo 1.000 CFU/g namesto 100.
• Prezrta vidna plesen. Če jo vidite, izdelek ni sprejemljiv, ne glede na to, kaj piše v starejšem poročilu.

Kam sodi rezultat v vaši dokumentaciji?

Mikrobiološka kakovost končnega izdelka je ena od točk dela A poročila o varnosti kozmetičnega izdelka, kot določa Izvedbeni sklep 2013/674/EU. Vaš ocenjevalec varnosti uporabi število kvasovk in plesni, število bakterij in določene mikroorganizme, da potrdi, da izdelek ustreza mejam, za konzerviranje pa se sklicuje na challenge test. Podpisano poročilo shranite v PIF skupaj s številko serije in različico formulacije.

Pogosta vprašanja

So kvasovke ali plesni v kozmetiki sploh dovoljene?

Da, v mejah. Kozmetika ni sterilna in nizko število neškodljivih gliv je sprejemljivo, dokler skupno število ostane v meji kategorije, Candida albicans ni prisotna in se število v življenjski dobi izdelka ne povečuje.

Koliko časa traja štetje kvasovk in plesni?

Že sama inkubacija traja več dni, ker plesni rastejo počasi. Naš test mikrobioloških specifikacij prinese podpisano poročilo PDF približno pet dni po prejemu vzorcev.

Ali brezvodni izdelki potrebujejo štetje kvasovk in plesni?

Pogosto da, zlasti z rastlinskimi praški ali če med uporabo pridejo v stik z vodo. Nekateri veljajo po ISO 29621 za nizkotvegane; odloči vaš ocenjevalec.

Ključne ugotovitve

• Število kvasovk in plesni (TYMC) meri žive glive v CFU/g, običajno po ISO 16212.
• Šteje se v skupno mejo: praviloma 100 CFU/g za izdelke za oči, dojenčke in sluznice ter 1.000 CFU/g za druge.
• Čisto štetje pokaže današnjo kakovost; challenge test pokaže zaščito med uporabo.
• Visoko število zahteva zadržanje serije, identifikacijo ter pregled surovin, vode, opreme in konzervansa.