Počet kvasinek a plísní v kosmetice: limity, metoda a výsledky

Do vaší schránky dorazí laboratorní protokol a jeden řádek zní „TYMC: 40 CFU/g“. Je to v pořádku? Počet kvasinek a plísní v kosmetice říká, kolik živých hub je ve vašem hotovém výrobku, a je to jedno z čísel, která posuzovatel bezpečnosti kontroluje, než formuli schválí. Stručně: laboratoře kvasinky a plísně obvykle počítají podle ISO 16212, výsledek se uvádí v CFU na gram nebo mililitr a spolu s počtem bakterií musí zůstat v limitu pro vaši kategorii výrobku, obvykle nejvýše 100 CFU/g u výrobků pro oči, kojence a sliznice a nejvýše 1 000 CFU/g u ostatní kosmetiky.

Stručná odpověď

TYMC (total yeast and mould count, celkový počet kvasinek a plísní) je počet hub v produktu zjištěný na kultivačních miskách. Je součástí běžného testu mikrobiologických specifikací, vedle celkového počtu aerobních bakterií a kontrol specifikovaných škodlivých organismů, jako je Candida albicans. Výsledek pod mezí detekce, obvykle uváděný jako „<10 CFU/g“, znamená, že nebyla nalezena žádná kvasinka ani plíseň.

Co počet kvasinek a plísní měří?

Kvasinky i plísně jsou houby, ale chovají se různě. Kvasinky jsou jednotlivé buňky tvořící hladké, krémové kolonie. Plísně rostou ve vláknech a tvoří chmýřité kolonie s barevnými spórami; jsou to zelené, černé nebo bílé skvrny, které můžete vidět na krému nebo kolem hrdla kelímku.

Houby se počítají zvlášť, protože snášejí nižší pH, méně dostupné vody a vysoký obsah cukru, takže výrobek s malým množstvím bakterií může přesto obsahovat houby. Jejich spóry se šíří vzduchem a rostlinným materiálem, takže typickými vstupními branami jsou botanické suroviny, prášky a jíly.

Výsledky se uvádějí v koloniotvorných jednotkách (CFU) na gram nebo mililitr: jde o odhad životaschopných jednotek, nikoli o přesný počet buněk.

Čtěte také ISO 17516 pro kosmetiku: mikrobiologické limity

Jak laboratoře test provádějí?

Referenční metodou pro kosmetiku je ISO 16212, „Cosmetics – Microbiology – Enumeration of yeast and mould“. Ve zkratce:

1. Odběr vzorku. Část výrobku se odebírá za aseptických podmínek, obvykle z neotevřeného balení.
2. Ředění a neutralizace. Vzorek se obvykle ředí v poměru 1:10 v kapalině, která zároveň neutralizuje konzervanty, takže nemohou skrýt skutečnou kontaminaci.
3. Roztěr. Zředěný vzorek se roztírá nebo zalévá selektivním agarem, případně se filtruje přes membránu, která se pak položí na agar. Médium obsahuje antibiotikum potlačující bakterie, takže rostou převážně houby.
4. Inkubace. Misky se inkubují při asi 25 °C několik dní, obvykle až pět, protože mnoho plísní roste pomalu.
5. Počítání. Kolonie se spočítají a vynásobí faktorem ředění, čímž se získá CFU/g nebo CFU/mL.

Před rutinním testováním dobrá laboratoř ověří, že neutralizátor pro vaši formuli skutečně funguje. To je nejdůležitější u silně konzervovaných výrobků a formulí s antimikrobiálními esenciálními oleji.

Jaké limity platí pro kvasinky a plísně?

V EU nařízení o kosmetických přípravcích (ES) č. 1223/2009 v textu zákona číselné mikrobiální limity nestanoví. Posuzovatelé bezpečnosti se proto opírají o ISO 17516 a SCCS Notes of Guidance, které používají dvě kategorie výrobků:

• Kategorie 1: výrobky určené speciálně pro děti do tří let, pro oblast očí a pro sliznice. Celkový počet aerobních mezofilních mikroorganismů by neměl překročit 100 CFU/g nebo mL.
• Kategorie 2: veškerá ostatní kosmetika. Celkový počet by neměl překročit 1 000 CFU/g nebo mL.

Aerobními mezofilními mikroorganismy se v ISO 17516 rozumí bakterie plus kvasinky a plísně, měřené podle ISO 21149 a ISO 16212. Proto váš protokol obvykle obsahuje dva řádky, TAMC a TYMC, a proto se údaj o kvasinkách a plísních započítává do celkového limitu. Kromě počtů nesmí být v 1 g nebo mL zjištěna kvasinka Candida albicans, stejně jako Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa a Staphylococcus aureus. Někteří prodejci si stanovují vlastní, přísnější limit pro kvasinky a plísně, proto se před testováním zeptejte.

Jak číst výsledek

• „<10 CFU/g“: při nejnižším testovaném ředění nic nevyrostlo. To je výsledek, který chcete.
• Nízké číslo, například 20 nebo 40 CFU/g: bylo nalezeno několik životaschopných jednotek. Přičtěte ho k počtu bakterií a porovnejte součet s limitem pro vaši kategorii.
• „Estimated“ nebo „est.“: vyrostlo velmi málo kolonií; údaj je přibližný, ale platný.
• Výsledek nad limitem: šarže nevyhovuje specifikaci.

Vzorový příklad: tělové mléko uvádí TAMC 30 CFU/g a TYMC 40 CFU/g. Součet 70 CFU/g je hluboko pod limitem 1 000 CFU/g pro výrobek kategorie 2. Stejná čísla jsou přijatelná i u očního krému, protože 70 je méně než 100. Oční krém s TYMC 150 CFU/g však nevyhoví, i kdyby nevyrostla ani jedna bakterie.

Čtěte také Kosmetika kategorie 1 a 2: mikrobiální limity

Které výrobky jsou nejohroženější?

• Krémy a mléka na vodní bázi s mírným konzervačním systémem nebo systémem „free-from“.
• Výrobky bohaté na rostlinné extrakty, botanické prášky, jíly nebo škroby, které mohou se surovinou přinést spóry.
• Formule konzervované organickými kyselinami, například sorbovou nebo benzoovou, když pH vystoupí příliš vysoko, než aby kyselina účinkovala.
• Kelímky a obaly se širokým hrdlem, do kterých zákazníci ponořují prsty.

Výrobky s velmi nízkou aktivitou vody, vysokým obsahem alkoholu nebo extrémním pH mohou být podle ISO 29621 zařazeny jako výrobky s nízkým mikrobiologickým rizikem. U nich může dokumentované posouzení rizika nahradit rutinní stanovení počtů, ale toto rozhodnutí patří vašemu posuzovateli bezpečnosti.

Počet dnes vs. ochrana zítra

Nízký počet kvasinek a plísní ukazuje, že šarže byla v době testování čistá. Neukazuje, že výrobek zůstane čistý, až ho zákazník otevře. To je úkol zátěžového testu konzervace, při kterém se výrobek záměrně naočkuje mikroorganismy, včetně kvasinky Candida albicans a plísně Aspergillus brasiliensis, a sleduje se 28 dní. Plísně se často kontrolují nejhůř, takže dokonalý počet nezaručuje úspěch. Většina výrobků na vodní bázi potřebuje oba výsledky.

Kdy testovat?

• Na šarži použité pro posouzení bezpečnosti, před podpisem CPSR.
• Na výrobních šaržích před uvolněním, s frekvencí stanovenou ve vašem systému kvality.
• Na začátku a na konci studie stability, abyste zjistili, zda počty během skladování rostou.
• Po změně dodavatele botanických surovin, vodního systému nebo výrobního místa.

Čtěte také Celkový aerobní počet v kosmetice: co znamená

Co dělat, když je počet příliš vysoký

1. Šarži izolujte. Neprodávejte ji a nemíchejte ji s čistými šaržemi.
2. Požádejte laboratoř o identifikaci. Vědět, zda jde o kvasinku, nebo plíseň a o kterou, ukáže na zdroj.
3. Zkontrolujte obvyklé podezřelé. Botanické suroviny, purifikovanou vodu, plnicí zařízení, těsnění a plnicí místnost.
4. Zkontrolujte konzervant. Ověřte pH, dávku konzervantu a to, zda systém pokrývá kromě bakterií i houby.
5. Po nápravném opatření test opakujte a šetření uložte do záznamů o kvalitě.

Časté chyby

• Odeslání vzorku z otevřeného, již používaného obalu.
• Testování pouze bakterií a zapomenutí hub u výrobku bohatého na botanické složky.
• Porovnání kojeneckého nebo očního výrobku s limitem 1 000 CFU/g místo 100.
• Ignorování viditelné plísně. Pokud ji vidíte, výrobek je nepřijatelný, ať už starší protokol říká cokoli.

Kam se výsledek v dokumentaci zapisuje?

Mikrobiologická kvalita hotového výrobku je jednou z položek části A zprávy o bezpečnosti kosmetického přípravku, jak stanoví prováděcí rozhodnutí 2013/674/EU. Váš posuzovatel bezpečnosti používá počet kvasinek a plísní, počet bakterií a specifikované organismy k potvrzení, že výrobek splňuje své limity, a pokud jde o konzervaci, odkazuje na zátěžový test. Podepsaný protokol uložte do souboru informací o přípravku (PIF) spolu s číslem šarže a verzí formule.

Často kladené otázky

Je nějaká kvasinka nebo plíseň v kosmetice přijatelná?

Ano, v mezích limitů. Kosmetika není sterilní a nízký počet neškodných hub je přijatelný, pokud celkový počet zůstává v limitu kategorie, Candida albicans chybí a počet během životnosti výrobku neroste.

Jak dlouho trvá stanovení počtu kvasinek a plísní?

Samotná inkubace trvá několik dní, protože plísně rostou pomalu. Náš test mikrobiologických specifikací dodá podepsaný protokol v PDF zhruba pět dní po přijetí vašich vzorků.

Potřebují bezvodé výrobky stanovení počtu kvasinek a plísní?

Často ano, zejména s botanickými prášky nebo při kontaktu s vodou během používání. Některé splňují podmínky nízkého rizika podle ISO 29621; rozhoduje váš posuzovatel.

Hlavní poznatky

• Počet kvasinek a plísní (TYMC) měří životaschopné houby v CFU/g, obvykle podle ISO 16212.
• Započítává se do celkového limitu: obvykle 100 CFU/g pro výrobky pro oči, kojence a sliznice a 1 000 CFU/g pro ostatní.
• Čistý výsledek ukazuje dnešní kvalitu; zátěžový test ukazuje ochranu během používání.
• Vysoký počet vyžaduje izolaci šarže, identifikaci a kontrolu surovin, vody, zařízení a konzervantu.