Contagem de Leveduras e Bolores em Cosméticos: Limites e Método

Chega-lhe à caixa de correio um relatório do laboratório com uma linha que diz “TYMC: 40 UFC/g”. Está bem? A contagem de leveduras e bolores em cosméticos indica quantos fungos vivos existem no seu produto acabado e é um dos valores que um avaliador de segurança verifica antes de aprovar uma fórmula. Em resumo: os laboratórios contam normalmente leveduras e bolores segundo a ISO 16212, o resultado é expresso em UFC por grama ou mililitro e, juntamente com a contagem de bactérias, tem de respeitar o limite da categoria do seu produto: tipicamente no máximo 100 UFC/g para produtos para os olhos, para bebés e para as mucosas, e no máximo 1000 UFC/g para os restantes cosméticos.

A resposta curta

O TYMC (contagem total de leveduras e bolores) é uma contagem em placa dos fungos presentes no seu produto. Faz parte de um teste de especificações microbiológicas de rotina, a par da contagem total de bactérias aeróbias e da pesquisa de organismos nocivos especificados, como a Candida albicans. Um resultado abaixo do limite de deteção, normalmente indicado como “<10 UFC/g”, significa que não foram encontrados leveduras nem bolores.

O que mede a contagem de leveduras e bolores?

As leveduras e os bolores são ambos fungos, mas comportam-se de forma diferente. As leveduras são células isoladas que formam colónias lisas e cremosas. Os bolores crescem em filamentos e formam colónias felpudas com esporos coloridos; são as manchas verdes, pretas ou brancas que pode ver num creme ou à volta do gargalo de um frasco.

Os fungos são contados em separado porque toleram um pH mais baixo, menos água disponível e muito açúcar, pelo que um produto com poucas bactérias pode, ainda assim, conter fungos. Os seus esporos viajam no ar e em material vegetal, o que faz das matérias-primas botânicas, dos pós e das argilas pontos de entrada típicos.

Os resultados são expressos em unidades formadoras de colónias (UFC) por grama ou mililitro: uma estimativa de unidades viáveis, não uma contagem exata de células.

Leia também ISO 17516 para cosméticos: limites microbiológicos explicados

Como realizam os laboratórios o teste?

O método de referência para cosméticos é a ISO 16212, “Cosméticos – Microbiologia – Contagem de leveduras e bolores”. Em traços gerais:

1. Amostragem. Retira-se uma porção do produto em condições assépticas, normalmente de uma embalagem por abrir.
2. Diluição e neutralização. A amostra é geralmente diluída 1 para 10 num líquido que também neutraliza os conservantes, para que não escondam uma contaminação real.
3. Sementeira. A diluição é espalhada ou vertida num agar seletivo, ou filtrada através de uma membrana que depois é colocada no agar. O meio contém um antibiótico que suprime as bactérias, pelo que crescem sobretudo fungos.
4. Incubação. As placas são incubadas a cerca de 25 °C durante vários dias, tipicamente até cinco, porque muitos bolores crescem lentamente.
5. Contagem. As colónias são contadas e multiplicadas pelo fator de diluição para obter UFC/g ou UFC/mL.

Antes dos testes de rotina, um bom laboratório verifica se o neutralizante funciona realmente para a sua fórmula. Isto é especialmente importante em produtos fortemente conservados e em fórmulas com óleos essenciais antimicrobianos.

Que limites se aplicam às leveduras e aos bolores?

Na UE, o Regulamento dos Produtos Cosméticos (CE) n.º 1223/2009 não fixa limites microbianos numéricos no texto da lei. Os avaliadores de segurança baseiam-se, em vez disso, na ISO 17516 e nas Notas de Orientação do SCCS, que usam duas categorias de produtos:

• Categoria 1: produtos especificamente destinados a crianças com menos de três anos, à zona dos olhos e às mucosas. A contagem total de aeróbios mesófilos não deve exceder 100 UFC/g ou mL.
• Categoria 2: todos os outros cosméticos. O total não deve exceder 1000 UFC/g ou mL.

Na ISO 17516, microrganismos aeróbios mesófilos significa bactérias mais leveduras e bolores, medidos com a ISO 21149 e a ISO 16212. É por isso que o seu relatório mostra normalmente duas linhas, TAMC e TYMC, e que o valor de leveduras e bolores conta para o limite global. Além das contagens, a levedura Candida albicans não pode ser detetada em 1 g ou mL, tal como Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. Alguns retalhistas definem um limite próprio mais exigente para leveduras e bolores, por isso pergunte antes de testar.

Como ler o seu resultado

• “<10 UFC/g”: nada cresceu na diluição mais baixa testada. É o resultado que se pretende.
• Um valor baixo, como 20 ou 40 UFC/g: foram encontradas algumas unidades viáveis. Some-o à contagem de bactérias e compare o total com o limite da sua categoria.
• “Estimado” ou “est.”: cresceram muito poucas colónias; o valor é aproximado, mas válido.
• Um resultado acima do limite: o lote não cumpre a especificação.

Um exemplo prático: uma loção corporal indica TAMC 30 UFC/g e TYMC 40 UFC/g. O total, 70 UFC/g, está bem dentro do limite de 1000 UFC/g de um produto da categoria 2. Os mesmos valores num creme para os olhos também são aceitáveis, porque 70 é inferior a 100. Mas um creme para os olhos com TYMC de 150 UFC/g não passa, mesmo que não tenha crescido qualquer bactéria.

Leia também Cosméticos categoria 1 vs categoria 2: limites microbianos

Que produtos correm maior risco?

• Cremes e loções à base de água com um sistema conservante suave ou “sem conservantes”.
• Produtos ricos em extratos vegetais, pós botânicos, argilas ou amidos, que podem trazer esporos com a matéria-prima.
• Fórmulas conservadas com ácidos orgânicos, como o ácido sórbico ou benzoico, quando o pH sobe demasiado para o ácido atuar.
• Frascos e embalagens de boca larga onde os clientes mergulham os dedos.

Os produtos com atividade da água muito baixa, elevado teor de álcool ou pH extremo podem ser classificados como de baixo risco microbiológico segundo a ISO 29621. Para estes, uma avaliação de risco documentada pode substituir as contagens de rotina, mas essa decisão cabe ao seu avaliador de segurança.

A contagem de hoje vs. a proteção de amanhã

Uma contagem baixa de leveduras e bolores mostra que o lote estava limpo quando foi testado. Não mostra que o produto continuará limpo depois de um cliente o abrir. Essa é a função do challenge test, em que o produto é deliberadamente inoculado com microrganismos, incluindo a levedura Candida albicans e o bolor Aspergillus brasiliensis, e acompanhado durante 28 dias. Os bolores são muitas vezes os mais difíceis de controlar, por isso uma contagem perfeita não garante a aprovação. A maioria dos produtos à base de água precisa de ambos os resultados.

Quando deve testar?

• No lote usado para a avaliação de segurança, antes de o CPSR ser assinado.
• Nos lotes de produção antes da libertação, com a frequência definida no seu sistema de qualidade.
• No início e no fim de um estudo de estabilidade, para ver se as contagens sobem durante o armazenamento.
• Após a mudança para um novo fornecedor botânico, sistema de água ou local de produção.

Leia também Contagem total de aeróbios em cosméticos: o que significa

O que fazer se a contagem for demasiado elevada

1. Coloque o lote em quarentena. Não o venda nem o misture com lotes limpos.
2. Peça ao laboratório a identificação. Saber se é uma levedura ou um bolor, e qual, aponta para a origem.
3. Verifique os suspeitos habituais. Matérias-primas botânicas, água purificada, equipamento de enchimento, juntas e a sala de enchimento.
4. Reveja o conservante. Verifique o pH, a dose de conservante e se o sistema cobre fungos além de bactérias.
5. Repita o teste após a ação corretiva e guarde a investigação nos seus registos de qualidade.

Erros comuns

• Enviar uma amostra de uma embalagem já aberta e usada.
• Testar apenas bactérias e esquecer os fungos num produto rico em botânicos.
• Comparar um produto para bebés ou para os olhos com o limite de 1000 UFC/g em vez de 100.
• Ignorar bolor visível. Se o consegue ver, o produto não é aceitável, seja o que for que um relatório mais antigo diga.

Onde fica o resultado na sua documentação?

A qualidade microbiológica do produto acabado é um dos elementos da Parte A do relatório de segurança do produto cosmético, tal como estabelecido na Decisão de Execução 2013/674/UE. O seu avaliador de segurança usa a contagem de leveduras e bolores, a contagem de bactérias e os organismos especificados para confirmar que o produto cumpre os seus limites e remete para o challenge test no que respeita à conservação. Guarde o relatório assinado no seu Dossiê de Informação do Produto, com o número do lote e a versão da fórmula.

Perguntas frequentes

É aceitável alguma levedura ou bolor num cosmético?

Sim, dentro de limites. Os cosméticos não são estéreis, e uma contagem baixa de fungos inofensivos é aceite desde que o total se mantenha dentro do limite da categoria, a Candida albicans esteja ausente e a contagem não aumente ao longo da vida do produto.

Quanto tempo demora uma contagem de leveduras e bolores?

Só a incubação demora vários dias, porque os bolores crescem lentamente. O nosso teste de especificações microbiológicas entrega um relatório PDF assinado cerca de cinco dias após recebermos as suas amostras.

Os produtos anidros precisam de uma contagem de leveduras e bolores?

Muitas vezes sim, sobretudo se contiverem pós botânicos ou houver contacto com água durante a utilização. Alguns qualificam-se como de baixo risco segundo a ISO 29621; quem decide é o seu avaliador.

Pontos-chave

• A contagem de leveduras e bolores (TYMC) mede os fungos viáveis em UFC/g, normalmente segundo a ISO 16212.
• Conta para o limite total: tipicamente 100 UFC/g para produtos para os olhos, para bebés e para as mucosas, e 1000 UFC/g para os restantes.
• Uma contagem limpa mostra a qualidade de hoje; o challenge test mostra a proteção durante a utilização.
• Uma contagem elevada exige quarentena, identificação e uma verificação das matérias-primas, da água, do equipamento e do conservante.